روز به روز تکنولوژی دانش های مختلف دچار پیشرفت میشوند. یکی از این علوم، زیست شناسی است. که در این مدت اخیر بسیار دچار تحول و پیشرفت شده است. در این علم تحقیق و مطالعه راجع به سلول های زیستی اهمیت بالایی دارد. آزمایشMTT هم در واقع یک تست است که میزان زنده ماندن یا مرگ و یا تاکثیر سلول ها را تحت شرایط مختلف مورد بررسی و آنالیز قرار میدهد. تیم آثل طب در ادامه قصد دارد به بررسی این تست یا آزمون بسیار مهم و کاربردی بپردازد. با ما همراه باشید.
خلاصه ای از آزمایشMTT ؟
تستMTT مخفف MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromideمیباشد. به معنای ساده آزمایشMTT روشی ساده برای بررسی بقای سلولی تحت مصرف برای مثال یک دارو یا ماده است و هدف این است که اثر سمیت ترکیبات، داروها یا دیگر مکمل ها روی سلول بررسی شود.
این روش بر اساس رنگ سنجی انجام میشود. به این صورت که کریستال های زرد رنگ تترازولیوم را مورد بررسی قرار میدهد. و تغییرات آن به وسیله آنزیم سوکسینات دهیدروژنازبه عنوان نتیجه تست بیان میشود.
پیش به سوی انجام تستMTT ؟
در ابتدا باید گفت که این آزمایش سه مرحله دارد: کشت سلولی (Seeding)، تیمار (Treatment) و در نهایت آنالیز MTT
مطلب قابل این است که هرکدام از این مراحل یک روز زمان میبرد.
نکته ی قابل توجه این است که این آزمایش یکی از قابل اطمینان ترین آزمایش های زیستی و بیوتکنولوژی میباشد. از مهم ترین دلایل قابل اطمینان بودن این روش نسبت به بقیه تست ها، دقت زیاد این تست در تشخیص سلول های زنده از مرده میباشد.
در ابتدای امر ماده تترازولیوم که ابتدایی و مهم ترین ماده این تست است، به صورت پودری همراه با ماده PBS استفاده میشود. با ترکیب این دو ماده محلولی بدست می آید که به شدت به نور حساس است و رنگ زرد هم دارد. با بار مثبت خود جذب غشای سلول ها می شود. پس از طی این مراحل این محلول زرد رنگ به کمک اندوسیتوز وارد سلول ها میشود و به میتوکندری می رود.
این ماده در میتوکندری بوسیله ی سوکسینات دهیدروژنازِمیتواند در سلول های تنفسی سلول فعالیت کرده، و در آنجا به رسوب هایی به رنگ بنفش تبدیل شود. درواقع این مسئله یعنی اگر سلول های موجود دستگاه زنده باشند، بخاطر آنزیم سوکسینات دهیدروژنازِ به رنگ بنفش نشان داده شده و قابل تشخیص است.
جهت تشخیص رنگ محلول حاصل از دستگاهی به نام اسپکتروفتومتر استفاده میکنیم. این دستگاه قادر است تراکم نوری سلول های زنده را در طول موج ۵۷۹ نانومتر با طول موج مبنای ۶۳۰ نانومترمشخص نماید.
برای انجام آزمایشMTT فارغ از دستگاه اصلی آن به برخی تجهیزات نیازداریم. برای استریل سازی ظروف شیشه ای نیاز به اتوکلاو است. برای گرم کردن محیط کشت و باز کردن نمونه فریز شده نیاز به بن ماری میباشد. برای جدا سازی سلول ها از سانتریفیوژ ها استفاده میکنیم. و از میکروسکوپ نوری invert نیز برای دیدن سلول ها استفاده میکنیم. همچنین در محیط آزمایشگاهی برای جلوگیری از پخش بو یا گاز های سمی از هود آزمایشگاهی کلاس II استفاده میکنیم.
دستگاه Elisa Reader چیست؟
دستگاه Elisa Reader دستگاهیست که بوسیله ی آن نتايج آزمايش MTT خوانده میشود. این دستگاه قادر به تعیین آنتی بادی ها در سیستم بصورت مستقیم میباشد.
نکات مهم آزمایشMTT
- بهتر است برای هر سلول 3 بار آزمایش انجام شود تا درصد خطا کاهش پیدا کند.
- تعداد سلول های مجاز درون چاهک باید بین 103 تا 105 سلول باشد.
- مقدار سلول های درون چاهک به هیچ وجه نباید بیشتر یا کمتر از مقدار گفته شده باشد. و حتما باید به طور دقیق شمارش شود.
- باید از طریق مقالات یا تحقیقات زمان اثر هر دارو را بطور دقیق بدست آوریم. زیرا برای انجام تست بسیار مهم و حیاتی است.
- دقت و تمرکز زیاد برای انجام این آزمون بصورت هر چه دقیق تر مهم ترین مسئله میباشد. که حتما باید در محیطی مناسب انجام شود.
